НОВАЯ МЕТОДИКА КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПИГМЕНТОВ В ЛИСТЬЯХ СТЕВИИ 

Фоминых Максим Михайлович, студент, Пензенский государственный университет (Россия, г. Пенза, ул. Красная, 40), E-mail: gagarinka1122@gmail.com
Хомутов Тимофей Олегович, студент, Пензенский государственный университет (Россия, г. Пенза, ул. Красная, 40), E-mail: Timofei_homutov@mail.ru
Курдюков Евгений Евгеньевич, кандидат фармацевтических наук, доцент, кафедра общей и клинической фармакологии, Пензенский государственный университет (Россия, г. Пенза, ул. Красная, 40), E-mail: e.e.kurdyukov@mail.ru 

615.1: 615.322: 615.036 

DOI

10.21685/2307-9150-2020-2-3 

Актуальность и цели. Известно, что в листьях стевии Stevia rebaudiana (Bert.) содержится различный комплекс биологически активных соединений (флавоноиды, фенилпропаноиды, сапонины, органические кислоты). Ввиду того, что в настоящее время целесообразным является пероральный прием высушенного и измельченного в порошок лекарственного растительного сырья, представляет интерес изучение других биологически активных соединений (БАС), содержащихся в растении, в частности пигментов [1, 2]. Листья стевии содержат комплекс природных пигментов, основными из которых являются производные хлорофилла и каротиноиды, представленные β-каротином и хлорофиллом а. Одним из важнейших свойств хлорофилла является противовоспалительное, ранозаживляющее и антибактериальное действие, также он имеет антиоксидантный эффект [3–5]. Каротиноиды обладают широким набором фармакологических свойств, в том числе антиоксидантными, радиопротекторными и антиканцерогенными, которые в совокупности оказывают положительное влияние на иммунитет [5]. В этом отношении большой интерес представляют листья стевии, содержащие данные соединения. В научной литературе имеются противоречивые данные по химическому составу листьев стевии, не представлены также и нормативные документы. Результаты исследования могут быть использованы для разработки нормативной документации на лекарственное растительное сырье из листьев стевии. Цель исследования – разработка методик количественного определения содержания каротиноидов и хлорофилла в листьях стевии.
Материалы и методы. Объектом исследования послужили высушенные листья стевии, заготовленные в Краснодарском крае, Республике Крым, Пензенской и Тверской областях. Качественный анализ суммы каротиноидов и хлорофилла проводили методом тонкослойной хроматографии из ацетоновой фракции, в следующей системе растворителей петролейный эфир – ацетон (6:4). Для количественного определения каротиноидов и хлорофиллов в извлечениях из сырья стевии использовали спектрофотометрический метод. Количественное определение каротиноидов в сырье стевии проводили с использованием 95 % этилового спирта, гексана, ацетона, петролейного эфира и этилацетата. Определение хлорофилла в сырье стевии проводили с использованием 95 % этилового спирта, гексана и ацетона. Измерение оптической плотности проводили в максимумах поглощения каротиноидов (450 нм) и хлорофилла а (664 нм).
Результаты. Для исследования качественного содержания пигментов в сырье стевии использовали метод тонкослойной хроматографии, по результатам которой визуально определяются четыре пятна. Одно из них желтого цвета с фактором удерживания (Rf) равным 0,93 относится к β-каротину, другое с Rf = 0,76 – α-криптоксантину и β-криптоксантину. Хлорофиллы a и b проявляются как пятна сине-зеленого и желто-зеленого цвета с Rf = 0,10 и 0,08 соответственно.
Выводы. С использованием разработанной методики определения каротиноидов и хлорофилла проанализированы образцы стевии, выращенные в различных регионах России. Было установлено, что содержание каротиноидов в листьях стевии варьирует от 4,33 до 7,15 мг%, хлорофилла от 3,63 до 4,21 мг%. 

Ключевые слова

Stevia rebaudiana, β-каротин, хлорофилл а, спектрофотометрия, тонкослойная хроматография 

 Скачать статью в формате PDF

1. Котельников, Г. П. Доказательная медицина. Научно обоснованная медицинская практика : монография / Г. П. Котельников, А. С. Шпигель. – 2-е изд., перераб. и доп. – Москва : ГЭОТАР-Медиа, 2012. – 242 с.
2. Новый терапевтический справочник / под ред. И. Н. Денисова, Н. А. Мухиной, А. Г. Чучалина. – Москва : ГЭОТАР-Медиа, 2005. – 608 с. – (Клинические рекомендации).
3. Семенова, Е. Ф. Антимикробная активность извлечений из сырья стевии / Е. Ф. Семенова, Е. Е. Курдюков, А. И. Шпичка // Актуальные проблемы медицинской науки и образования (АПМНО–2017) : сб. ст. VI Mеждунар. науч. конф. (г. Пенза, 14–15 сентября 2017 г.) / редкол.: А. Н. Митрошин, С. М. Геращенко. – Пенза : Изд-во ПГУ, 2017. – С. 144–146.
4. Курдюков, Е. Е. Макро- и микроморфологические особенности листьев стевии Ребо Stevia rebaudiana Bertoni при интродукции в Среднем Поволжье / Е. Е. Курдюков, Е. Ф. Семенова // Научные ведомости. Сер.: Медицина. Фармация. – 2017. – № 26. – С 137–145.
5. Методики идентификации различных пигментов и количественного спектрофотометрического определения суммарного содержания каротиноидов и белка в фитомассе S. platensis (Nords.) Geilt. / С. В. Первушкин, В. А. Куркин, А. В. Воронин, А. А. Сохина, И. Ф. Шаталаев // Растительные ресурсы. – 2002. – Т. 38, № 1. – С. 112–119.
6. Арзамасцев, А. П. Государственные стандартные образцы лекарственных веществ (проект общей фармакопейной статьи) / А. П. Арзамасцев, В. Л. Дорофеев, Н. П. Садчикова // Ведомости научного центра экспертизы и государственного контроля лекарственных средств Минздрава России. – 2000. – № 3. – С. 24–26.
7. Гергель, А. В. Спектрофотометрическое определение количественного содержания хлорофиллов и каротиноидов в некоторых растениях представителей рода Moreceae при использовании разных экстрагентов / А. В. Гергель // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции. – 2010. – Вып. 64. – С. 25–27.
8. Ульяновский, Н. В. Разработка экспрессных методов аналитической экстракции каротиноидов из растительного сырья / Н. В. Ульяновский, Д. С. Косяков, К. Г. Боголицын // Химия растительного сырья. – 2012. – № 4. – С. 147–152.
9. Писарев, Д. И. Разработка экспресс-метода определения каротиноидов в сырье растительного происхождения / Д. И. Писарев, О. О. Новиков, Т. А. Романова // Научные ведомости Белгородского государственного университета. Сер.: Медицина. Фармация. – 2010. – № 22 (93). – С. 119–122.
10. Печинский, С. В. Структура и биологические функции каротиноидов / С. В. Печинский, А. Г. Курегян // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. – 2013. – № 9. – С. 4–15.
11. Karnjanawipagul, P. Analysis of β-carotene in carrot by spectrophotometry / P. Karnjanawipagul, W. Nittayanuntawech, P. Rojsanga, L. Suntornsuk // Mahidol University Journal of harmaceutical science. – 2010. – Vol. 37, № 1-2. – Р. 8–16.
12. Чечета, О. В. Стабильность каротиноидов в растительных маслах при хранении / О. В. Чечета, Е. Ф. Сафонова, А. И. Сливкин // Фармация. – 2008. – № 2. – С. 12–14.